Elektroforeza: kaj je, čemu služi in kako se izvaja

Elektroforeza je laboratorijska tehnika, ki se izvaja z namenom ločevanja molekul glede na njihovo velikost in električni naboj, tako da je mogoče diagnosticirati bolezni, preveriti izražanje beljakovin ali identificirati mikroorganizme.

Elektroforeza je preprost in poceni postopek, ki se uporablja v laboratorijskih rutinah in v raziskovalnih projektih. Glede na namen elektroforeze bo morda treba na primer opraviti druge teste in preiskave, da bi lahko postavili diagnozo.

Čemu je namenjena

Elektroforezo je mogoče izvajati za več namenov, tako v raziskovalnih projektih kot v diagnostiki, saj gre za preprosto in poceni tehniko. Tako lahko elektroforezo opravimo na:

• Ugotovite viruse, glive, bakterije in parazite, pri čemer je ta aplikacija pogostejša v raziskovalnih projektih;
• Test očetovstva;
• Preverite izražanje beljakovin;
• Ugotovite mutacije, ki so na primer koristne pri diagnozi levkemij;
• Analizirajte vrste hemoglobina v obtoku, kar je koristno pri diagnozi srpastocelične anemije;
• Ocenite količino beljakovin, prisotnih v krvi.

Glede na namen elektroforeze bo morda treba opraviti druge dopolnilne teste za zdravnika, da bo dokončal diagnozo.

Kako se to naredi

Za elektroforezo je potreben tudi gel, ki je lahko poliakrilamid ali agaroza, odvisno od cilja, pufer za elektroforezo in kad, označevalec molekulske mase in fluorescentno barvilo, poleg UV ali LED svetlobne opreme, znane tudi kot transilluminator.

Po pripravi gela je treba postaviti poseben predmet, da naredite vdolbinice v gelu, popularno imenovanem glavnik, in pustite, da se gel strdi. Ko je gel pripravljen, samo nanesite snovi v jamice. Za to je treba v eno vdolbinico postaviti označevalec molekularne teže, pozitivno kontrolo, to je snov, za katero se ve, kaj je, negativno kontrolo, ki zagotavlja veljavnost reakcije, in vzorce, ki jih je treba analizirati. Vse vzorce je treba zmešati s fluorescentnim barvilom, saj je tako mogoče vizualizirati trakove na transilluminatorju.

Gel z vzorci je treba položiti v posodo za elektroforezo, ki vsebuje določeno pufersko raztopino, nato pa napravo vklopiti tako, da pride do električnega toka in posledično potencialne razlike, kar je pomembno za ločevanje delcev glede na glede na njihovo obremenitev in velikost. Čas delovanja elektroforete se razlikuje glede na namen postopka in lahko traja do 1 ure.

Po določenem času si je mogoče ogledati rezultat elektroforetskega teka skozi transilluminator. Ko je gel postavljen pod UV ali LED svetlobo, je mogoče vizualizirati pasovni vzorec: večja kot je molekula, manj se seli in se približa vdolbinici, medtem ko je molekula lažja, večji je selitveni potencial.

Za potrditev reakcije je treba vizualizirati pasove pozitivne kontrole in v negativni kontroli ničesar, sicer je indikativno, da je prišlo do kontaminacije in je treba celoten postopek ponoviti.

Vrste elektroforeze

Elektroforezo lahko izvajamo za različne namene in glede na njen namen lahko uporabimo več vrst gelov, najpogostejša pa sta poliakrilamid in agaroza.

Elektroforeza za identifikacijo mikroorganizmov se pogosteje izvaja v raziskovalnih laboratorijih, vendar se za diagnostične namene elektroforeza lahko uporablja za prepoznavanje hematoloških bolezni in bolezni, ki se razvijejo s povečanjem količine beljakovin, saj so glavne vrste elektroforeze:

1. Elektroforeza hemoglobina

Elektroforeza hemoglobina je laboratorijska tehnika, ki se izvaja za identifikacijo različnih vrst hemoglobina, ki krožijo v krvi, kar omogoča ugotavljanje prisotnosti bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina. Tip hemoglobina se identificira z elektroforezo pri določenem pH, idealno med 8,0 in 9,0, pri čemer se preveri vzorec pasov, ki ga lahko primerjamo z običajnim vzorcem, kar omogoča identifikacijo prisotnosti nenormalnih hemoglobinov.

Za kaj se naredi: Elektroforeza hemoglobina se izvaja za raziskovanje in diagnosticiranje bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina, kot so anemija srpastih celic in bolezen hemoglobina C, poleg tega pa je koristna tudi za razlikovanje talasemije. Naučite se razlagati elektroforezo hemoglobina.

2. Elektroforeza beljakovin

Elektroforeza proteinov je izpit, ki ga zdravnik zahteva, da oceni količino beljakovin, ki krožijo v krvi, in tako ugotovi bolezni. Ta test se opravi iz vzorca krvi, ki ga centrifugiramo, da dobimo plazmo, del krvi, ki ga med drugimi sestavljajo beljakovine.

Po elektroforezi je mogoče vizualizirati vzorec pasov, nato pa je graf, v katerem je navedena količina vsake frakcije beljakovin, bistven za diagnozo.

Za kaj se to naredi: Elektroforeza z beljakovinami omogoča zdravniku, da preuči pojav multiplega mieloma, dehidracije, ciroze, vnetja, bolezni jeter, pankreatitisa, lupusa in hipertenzije glede na pasovni vzorec in graf, predstavljen v poročilu o pregledu.

Razumeti, kako se to naredi in kako razumeti rezultat beljakovinske elektroforeze.

Je bila ta informacija uporabna?

Da ne

Vaše mnenje je pomembno! Tukaj napišite, kako lahko izboljšamo svoje besedilo:

Kakšno vprašanje? Za odgovor kliknite tukaj.

E-poštni naslov, na katerega želite prejeti odgovor:

Preverite potrditveno e-poštno sporočilo, ki smo vam ga poslali.

Tvoje ime:

Razlog za obisk:

--- Izberite svoj razlog --- BolezenLive boljePomagajte drugi osebi Pridobite znanje

Ali ste zdravstveni delavec?

NeFizicarFarmacevtska medicinska sestraNutricionistBiomedicinskiFizioterapevtKozmetikDrugo

Bibliografija

• BIOSFERA ENCIKLOPEDIJE, ZNANJE ZNANSTVENEGA CENTRA. Elektroforeza: koncepti in aplikacije. 2015. Na voljo na :. Dostopno 24. septembra 2019
• KASVI. Kaj je elektroforeza in zakaj je pomembna?. Na voljo v:. Dostopno 24. septembra 2019